测孕纸的工作原理是检测hCG值，即人体绒毛膜促性腺激素的值。这种激素是由胎盘制造的，一般在怀孕几天后它就会出现在尿液里，但由于量少，开始不易测验出来，直到10天至14天才日益明显。
虽然许多种测孕纸上都表明女性在错过正常经期1天之后便可做怀孕自测，但实际上，不是所有怀孕女性排放hCG激素的速度和数量都相同，这是因人而异的。过早地做尿液测试，所呈现的阴性反应可能是错误的。所以，最好在月经期迟来两周后再做怀孕自测，这样结果比较准确。
最早的话，在房事后的7-10天即可检测，但怀孕时间越长越准确。在使用验孕试纸前，务必先仔细阅读包装盒上的所有说明，有些测孕纸可能会指定必须采当天早上第一次尿液，才能得到最准确的验孕效果。
